关键词：茶树；短穗扦插；茶苗移栽
1.采穗园管理
1.1品种选择
采穗园提供插穗，宜选中龄茶园，要求茶树的品种优良，纯度须达100%。
1.2修剪
茶园中的新旧茶树都应及时修剪，长势较好的青壮龄茶树深修剪，生长衰退的老树重修剪。修剪时间宜选春夏季，通常春茶前修剪的枝条供夏季扦插，夏茶前修剪的枝条供秋冬季扦插。
1.3施肥
母树施肥应适当增加磷钾肥的比例，667m2施硫酸钾复合肥30～40kg。
1.4病虫防治
防治病虫害，喷施低毒长效农药，必要时停止养穗，禁止病虫枝条外运。病虫防治应以防为主，注意加强病虫检测，同时，可对剪穗后的母树喷洒农药进行有效防治。
2.苗圃选择与管理
2.1选择苗圃
扦插苗圃宜选在地势平坦、水源充足、排灌方便、避风向阳、交通便利的地方，要求苗圃土壤疏松、通气性好、肥力较高，且保肥力和保水性好，其中微酸性沙质土壤较好。还应注意，此前种茶多年或种植烟草蔬菜的地块不宜选作苗圃。
2.2整理苗床
可分2次翻耕苗床，第1次全面深耕30cm左右，第2次在约20cm耕层内精细整地，土块应耙碎、耙平、晒透，促进土壤疏松。苗床宜东西向，以减少阳光射入。苗床的适宜长宽为15～20m、畦面宽1～1.3m、畦高15～20cm、畦沟宽约30cm。
2.3修排水沟
在苗圃四周修建排水沟，用以排水防渍，排水沟宜宽40～50cm，深30～40cm，沟底比畦底深。也可在排水沟中修蓄水池，用以蓄水灌溉，池间间隔保持4m。
2.4搭棚遮a
采用高棚，棚高约2m，每隔3～4m立水泥柱，棚顶拉铁丝，铺遮阳网，以保证较好的透光性、通风性和透气性。
3.插穗选取与处理
插穗宜选当年生、半木质化的棕红色和黄绿色枝条，且要求腋芽饱满、无病虫害。通常剪取3～4cm长的短穗，1个短穗上带有1个饱满腋芽和1片完整叶片，可在1个节间剪取1个短穗，节间过短的枝条可2节剪1个插穗，保留上端叶片即可，剪口应平滑，保证叶和芽完整。
4.扦插
4.1扦插时间
春插通常在4月份，宜选择土壤肥沃的苗圃和健壮的插穗。夏插通常在6～8月上旬，夏季气温高，插穗愈合和发根快，成活率高，但应注意防晒遮荫。秋插通常在8月中旬～10月上旬，插穗的成活率也较高。冬插通常在10月中旬～12月，多在气候温暖的茶区应用，冬季气温低，发根慢，还应注意防寒冻伤。我国多数茶区选择夏插，而春插和冬插的管理要求较高，较少采用。夏插时，因气温高、光照强，扦插宜在10：00前或15：00后阳光较弱时进行。
4.2短穗扦插方法
扦插宜在雨后进行，此时苗床土壤湿润，对扦插有利，适宜的扦插行距7～10cm，株距2～3cm，保证叶片互不重叠，667m2可扦插20～25万株。芽和叶柄要露出土面，叶片不可粘土，且保持同向伸展。扦插完1行后，轻轻沿插穗行压实泥土，使插穗与土壤充分结合。扦插后应立即浇水，并进行遮荫。
5.扦插苗管理
5.1浇水
苗圃的土壤含水量应维持在70%～80%，插穗生根前则要求在80%～90%。扦插后立即浇透水，扦插初期，每天早晚各浇水1次，扦插约40d后，每天浇水1次，若已生根，可隔天浇水1次或几天沟灌1次，沟灌时灌水高度不可超过苗床的3/4。
5.2遮荫
扦插后立即遮荫，发根初期遮光度控制在70%，中后期控制在40%～50%，待茶苗逐渐生根长叶，可逐步增加光照。
5.3施肥
施肥时应遵循先淡后浓、少量多次、勤施薄施的原则，随着茶苗生长逐渐增加肥量。每月可施肥1～2次，采用有机肥或化肥，均匀喷撒在苗床上，施肥后及时浇水。
5.4除草
应及时拔除杂草，除草时不可伤到茶苗根系。可每周除草1次，除草后浇水，使插穗与土壤充分结合。
5.5除花蕾
及时摘除花蕾，避免消耗过多养分，除花蕾后浇水1次。
5.6病虫害防治
危害插穗的常见病害有云纹叶枯病、炭疽病等，常见虫害有茶尺蠖、螨类、卷叶蛾等。应及时治疗病虫害，对付病害可每月喷1～2次的0.5%～0.6%石灰半量式波尔多液，防治虫害可喷施低毒长效农药。
6.茶苗移栽
6.1移栽时间
宜选在茶苗地上部处于休眠期，根系生长活跃，且温度、光照、土壤水分含量条件都对茶苗根系恢复有利的季节移栽，此时的移栽成活率较高。长江流域宜在10月中旬～11月或2月下旬～3月下旬移栽，江北茶区宜在春季移栽，有春旱的茶区宜在6～7月移栽。
6.2起苗
起苗时宜选苗高25cm以上，主干基部粗3～4mm，且无病虫害的茶苗。起苗宜在阴天、早晨或傍晚进行，起苗前浇水淋地，保证土壤疏松湿润。起苗时不宜用手拔苗，应用锄头等工具掘苗，以防损伤根系。起苗要求根系完整、带土移栽，起苗后的茶苗注意防风防晒。
6.3运输
远途运输前分等级捆苗，苗捆的大小适度，捆好后可用黄泥浆粘根，并用稻草包裹根部。运输途中将苗木直立放置在阴凉处，喷水保湿或假植，注意防风、防晒、防淋，避免紧压堆闷茶苗。
6.4垦地施肥
栽植前应垦地，开设排水沟，防止苗地积水。根据种植密度开种植沟，深度宜>30cm。在种植沟侧开施肥沟，撒施有机肥和氮磷钾复合肥，肥料与土壤拌和并盖土，土层厚度不超过5cm，施肥后沟的深度宜保持在10～15cm。
6.5栽植
根据茶树品种、地形条件、土壤肥力等确定茶苗种植密度。若在平地缓坡、土壤肥力中等的茶园种植灌木型茶树，宜采用单行条栽，行距约1.5m，丛距约0.33m，每丛2～3株。
定植时一手将苗扶直，一手填土，待土覆盖至接近茶苗泥门不露根须时，向上轻提茶苗，使根系自然舒展。及时将根际土壤压紧实，向根部盖土直至高出泥门3～5cm为止。定植后浇足定根水，再以松土覆盖，也可铺树叶、稻草等，以防止水分蒸发。
6.6荼苗管理
（1）定型修剪。茶苗移栽后应据茶苗生长情况及时定型修剪，剪除离地面15～20cm以上的枝叶，以减少叶面蒸发。
（2）浇水。新移栽后注意保持土壤湿润，及时适度浇水，促进幼苗成活。
（3）防寒保暖。冬季应培土壅根，增厚土层，铺草保暖，还可在迎风面的阴坡设置挡风障，用以防风防寒。
（4）抗旱。旱季来临前可中耕除草，并供应充足水肥。注意培土保湿，也可通过铺草达到保水降温的目的。（5）排水。雨季来临前进行茶苗根基培土，并及时清理排水沟，防止积水。（6）施肥。茶苗开始长新根和新梢时可适时施肥，施肥遵循少量、多次原则，不施用未经腐熟的有机肥，防止因发酵烧伤根部。（7）除草。通过采用喷施化学除草剂和人工拔草的方法及时清除杂草，防止草荒。（8）病虫害防治。主要防止地下害虫咬食幼根。
关键词蛹虫草；人工栽培；种子液；扩大生产；工艺流程
中图分类号S567.35文献标识码B文章编号1007-5739（2016）21-0075-01
蛹虫草（Cordycepsmilitaris）是一种珍贵的药（食）用真菌，寄生于鳞翅目昆虫蛹体后能形成真菌与昆虫复合体，属子囊菌纲，肉座菌目，麦角菌科，虫草属，与冬虫夏草（C.sinensis）同属异种，故又名北冬虫夏草、北虫草、蛹草、蛹草菌等[1-4]。已有研究表明，蛹虫草子实体中具有多种药用成分如虫草素、多糖和虫草酸，具有滋肺益气、增精益肾、止血化痰、抑制肿瘤、延缓衰老、增强免疫力等作用，并在市场上得到广泛应用[5-6]。由于野生蛹虫草大面积采挖已面临枯竭，目前人工蛹虫草已广泛栽培，在蛹虫草的人工栽培条件、化学成分组成、药理作用、临床医疗保健功效等方面取得了较大进展[6-7]。笔者也从新疆地区采集野生蛹虫草子实体进行了分离得到优良菌株，进行了人工栽培研究与示范，也取得了较好的效果[8]。为了大规模化对蛹虫草人工栽培，需要对批量优质蛹虫草菌悬液进行制备，才能满足扩大再生产需要。为此，笔者在已有实验室装备和研究的基础上，从优化发酵工艺方面入手，对发酵罐中培养调节温度、pH值、通气量等因素进行了控制，筛选出了最佳的发酵优化条件，制备的种子液满足扩大再生产的需要。现对蛹虫草菌种培养液发酵生产工艺流程进行了总结，以期为批量制备蛹虫草种子培养液提供技术依据。
1供试菌株
供试菌株已经本实验室经单子囊孢子分离，进行分子生物学鉴定与人工筛选，获得了不同型MAT1-1和MAT1-2代表菌株[8-9]。
2培养基制备
改良马铃薯（PDA）固体培养基[10]：马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨3g，琼脂16g，磷酸二氢钾（KH2PO4）2g，七水硫酸镁（MgSO4・7H2O）1g，复合VB25mg，用水补至1000mL，pH值6.5～7.0。改良PD培养基（g/L）：马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨3g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，复合VB25mg，pH值6.5～7.0。种子发酵培养基采用改良PD培养基。
3工艺流程
3.1倒平板
将改良型PDA固体培养基加热熔化，待温度冷却至55～60℃时在无菌操作下倒入已灭菌的培养皿中，培养基冷却凝固后倒放备用。
3.2活化
从冰箱中取出不同型MAT1-1和MAT1-2的蛹虫草优良菌种，在无菌操作下分别接种于改良型PDA培养基上，恒温培养箱21℃±1℃光照培养15～20d，待菌株长至近培养皿边缘时放置4℃冰箱备用。
3.3接种
将长满菌株的培养基从冰箱中取出，无菌条件下用灭菌牙签挑取少量粉色的分生孢子，接种至装有灭好菌的改良PD液体培养基的锥形瓶中。
3.4液体摇培
将含有不同型的接N好的锥形瓶放在摇柜中进行摇培，170r/min，（21±1）℃下恒温震荡培养3～4d，获得许多含有小米粒的菌丝球的少量种子菌悬液。
3.5种子液扩大生产
以LiFlusGX发酵罐为例，进行了蛹虫草菌株种子液扩大生产，具体如下。
3.5.1发酵罐调试。
（1）pH电极405-BPASpH值校准。配制校准液（pH值分别为4.01和6.86），开机点主页面的calibration.继续pHcalibration，先用蒸馏水润洗点击，再用餐巾纸擦拭，将配制好的标准液分别放入50mL试管中，倒入15～20mL即可。并将电极先后插入pH值6.86、pH值4.01的校准液中，静置与校准。
（2）溶氧电极INPRO6800溶氧电极准备。将溶氧电极的下端5cm处电极头旋开，用拇指盖抵住电极头下端金属圈将其内部结构取出来。在取出来的内部结构中倒满极化液，注意不能有气泡，否则底部的膜会破。
3.5.2发酵罐封装灭菌。清洗发酵罐LiFlusGX各个部位，然后将各个电极安装到发酵罐上，将适量酸、碱倒入瓶中，并注意用皮筋底部扎口，目的是防止腐蚀皮管和发酵罐。并将各个出口用封口膜紧紧封住，用报纸包住冷凝管灭菌，一般121℃灭菌15～20min，完成后快速移到无菌操作台下紫外灭菌30min。
3.5.3发酵培养。在无菌条件下按灭菌好的发酵培养基：种子菌悬液为10～15∶1（体积比）的比例倒入发酵罐，封好后移出。连接各个电极，开通各个电源，通过蠕动泵调节酸、碱通过皮管到达发酵罐并调成自动模式。设置发酵条件（温度20～25℃，pH值6.0～6.5，通气量1mL/min），培养2～3d，菌丝球布满培养液，发酵完成。
3.5.4种子液保存。对超净工作台灭菌30min，将发酵完成的发酵罐移到超净工作台中，用酒精棉球擦拭整个发酵罐体，将菌种培养液倒入已预先灭菌好的玻璃容器内，并用标鉴标注时间、条件、工作人员等信息，放入4℃冰箱保存备用。
4参考文献
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论文摘要针对大别山区桑产茧量不高的实际，介绍了该地区桑园高产栽培技术，以期为提高桑叶产量，进而提高桑产茧量提供指导。
蚕桑生产是大别山区传统的支柱产业，特别是近几年随着蚕桑生产的比较效益逐年提高，农民自发栽桑养蚕的积极性高涨。但大多农民在发展的时候只盲目追求桑园面积的最大化，而忽视了对桑园的管理，导致桑叶的产量不高，桑产茧量也一直在510kg/hm2左右徘徊，与桑产茧1500kg/hm2的目标有相当大的差距。为此，笔者根据多年来从事蚕桑技术推广工作的经验，将大别山区桑园高产栽培技术介绍如下。
1新建标准桑园
1.1建园准备
选择土壤肥沃、排灌条件较好的地块建园。
1.2深耕整地，施足基肥
山地栽桑应修水平梯田。全面耕翻深耕40cm左右，然后平整园地；开沟吊漕（宽30cm、深50cm），挖时将表土和底土分开，挖松底沟。挖后漕内施入有机肥60t/hm2和过磷酸钙750kg/hm2，然后将表土回填到肥料上，苗木栽在表土上。
1.3栽桑时间
桑树落叶后至土壤封冻前栽下，此时桑苗处于休眠状态，成活率高。春季发芽早，以11月栽植为宜。
1.4栽植密度与形式
以棵行距33cm×200cm栽植，中干养成。
1.5选苗、修根
桑苗要选栽育711、农桑14号、华明桑等高产抗病强的优良品种。栽前将苗木进行大小分级，剪去过长根和受伤部分，剔除病虫害苗。长途运输苗根干萎的可浸泥浆稀粪水后立即栽植。
1.6栽植方法
以确定的株行距，拉好栽植绳，把桑苗放入栽植沟内，扶正苗木，先填剩余的细表土壅根，边壅边轻提苗干，使根系向四方伸展并与土壤密接，再壅土踏实。桑苗根颈入土8cm左右，沙土宜深，粘土宜浅。栽后浇足水，然后在距地面35cm处定干。最后将底土覆于桑根颈上方周围成馒头状，可保湿、防冻、护干，促进桑苗来年早发芽。
2培养理想树型
2.1桑树树型养成的目的
促使树型整齐，枝叶分布均匀，通风透光，促进营养生长，减少花椹，防止病虫害，便于管理和收获桑叶，提高桑叶的产量和质量。一般以中干有拳式树型为宜。
2.2中干有拳桑养成法
树干高度105cm，以2层枝干为好，3年养成，第4年正式收获。①第1年：苗株春季发芽后，待新梢长到15cm时疏芽，选留2~4个匀称壮芽任其生长，当年养成2~4根壮条，晚秋蚕后每条留叶6片左右。②第2年：春季发芽前离地面65cm处剪定。发芽后每枝干选留2~3个壮芽，每株养成4~8根壮枝，晚秋蚕结束后每枝干留叶7~8片。③第3年：养过春蚕后提早离地面105cm处剪伐，养成第2枝干。发芽后每枝干留2~3个健壮芽生长，每株养成8~16根壮条。以后每年养过春蚕后离地面105cm处剪伐，形成桑拳。
3桑树管理
3.1科学施肥
3.1.1春肥。春肥占全年总肥量的20%，桑树发芽前15~20d施下，一般在3月20日左右施下。施45%复合肥或尿素300kg/hm2。春蚕大蚕期叶面喷肥2~3次，配置浓度为：复合肥1%、尿素0.5%、过磷酸钙1%；每隔2~3d喷1次可增产桑叶10%左右。
3.1.2夏肥。夏肥占全年施肥量的40%，用速效肥。6月初完成夏伐后立即施下。一般分2次施用，夏伐后与疏芽后各施1次。此期经历6~8月3个月，桑树枝条生长占夏秋总生长量的90%。施足夏肥，不仅增加当年夏秋叶产量，且关系来年春叶产量。
3.1.3秋肥。秋肥占全年施肥量的10%，8月施下，速效肥为主，适当增施磷、钾肥。
3.1.4冬肥。冬肥占全年施肥量的30%，桑树落叶后施入，以迟效性有机肥为主；结合冬耕施增施硼肥22.5kg/hm2。
3.1.5桑园间作绿肥。绿肥翻入土中，可增加桑园有机质，达到“以园养桑”的目的。冬绿肥在9月至10月中旬播种，品种有蚕豆、红花草等，4月上旬翻埋；夏绿肥在5~6月播种，品种有绿豆、饭豆等，在7月中下旬收割。
3.2桑园耕耘
3.2.1冬耕。桑树落叶后结合绿肥播种和施冬肥进行，深度20cm，离桑根10cm左右，土块可不打碎。
3.2.2春耕。桑树发芽前结合埋冬绿肥进行，深度10cm，土块要打碎。
3.2.3夏耕。夏伐后随时进行，为避免伤害桑根，深度5~10cm。可结合除草与播种夏绿肥进行浅耕。
3.3桑园除草
桑园杂草不仅与桑根争夺养分、水分，影响通风透光，而且是病虫潜伏的场所。因此，全年要抓好3期5次除草工作。
3.3.1春除发芽草。桑树发芽前的4月初除去幼草，可收到事半功倍的效果，一般除1~2次。
3.3.2夏除黄霉草。夏伐后雨水多，气温高，光照足，杂草生长快，6~7月除草2次。
3.3.3秋除开花草。秋季除去开花结籽草可减少来年杂草蔓延，除草1~2次。除人工除草外，还可用10%的草甘膦水剂15kg/hm2除草。
3.4桑园排灌水
3.4.1排水。桑园积水会影响土壤通气，致使桑根呼吸困难，严重的会死亡，因此，做好开沟排水工作是十分必要的。
3.4.2灌水。桑园春季和夏伐后2次发芽期以及夏秋的旺盛生长期，都需要充足的水分。根据天气情况，春季在发芽前开叶后各灌1次水，春蚕期灌水2次，做到前期少灌后期多灌，夏伐后灌水1~2次，秋季7~10d无降雨时要及时灌水。夏秋季灌水需在下午4时后进行。
3.5桑园护理
3.5.1摘心。选择晴天将桑树新梢的嫩心摘去，促使幼叶成熟。春蚕大蚕期5龄用桑前10d摘心，可提高叶质和叶量。
3.5.2疏芽。夏伐后把过密新梢适当疏去，分2次进行。第1次当新梢长到10cm左右时疏去过密新梢；第2次结合大蚕用叶，用桑剪剪去细弱、下垂和位置不当的过密新梢。
3.5.3整枝。在冬季修去桑树的死拳、枯桩、病虫枝、小细枝，可增强树势，减少病虫害。修下的枝条立即集中烧毁，防止病虫害蔓延。
3.5.4剪伐。在春蚕5龄期后边采边伐，剪口在定拳处，时间要求在6月5日前全部结束。
3.5.5剪梢。在晚秋后剪去桑树枝条梢端一部分，可提高春季发芽率，增产桑叶10%左右，还可减少冬季冻害，一般剪去枝条总长的1/4。
3.6合理收获桑叶
做到量叶养蚕，不养过头蚕。夏蚕饲养张数约为春蚕的25%，秋蚕饲养量可与春蚕相当或略大于春蚕饲养量。夏蚕收获采叶占条长的1/2；中秋蚕留8片叶，晚秋蚕留4片成熟叶，一律摘叶留柄，以保护枝条腋芽，为下年丰产打好基础。
4桑树病虫害防治
4.1桑树萎缩病
加强检疫，选栽良桑，注重肥培管理；发现病株及早挖除，集中烧毁。